Istituito nel 1973, è ospitato all'interno dello storico teatro, uno dei più gloriosi della Roma pontificia, costruito nel 1732 su progetto del marchese Gerolamo Theodoli e sotto la direzione di Nicola Zabaglia. Oltre a illustrare la storia, la topografia e l'attività dell'istituzione in cui sorse, il piccolo museo acquista un particolare interesse perché le diverse opere esposte consentono di ripercorre cronologicamente la storia del teatro. Sono conservati frammenti di decorazioni murarie ottocentesche, rilievi in gesso di Alfredo Biagini (1926), costumi di scena, studi e disegni preparatori, una capriata in legno, macchinari settecenteschi per il sollevamento del sipario e delle scene, documenti, riproduzioni fotografiche, locandine e ritratti di attori. Confinante con lo spazio museale si trova la Casa del Burcardo (Johannes Burckhardt, 1445-1506), di cui il teatro occupa alcuni ambienti